河滩冬青组织培养技术规程

ICS 65.020.20 B 61 DB32 江 苏 省 地 方 标 准 DB 32/T 3889—2020 河滩冬青组织培养技术规程 Technical regulation for tissue culture of Ilex metabaptista 2020 - 10 - 13 发布 江苏省市场监督管理局 2020 - 11 - 13 实施 发 布 DB32/T 3889—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由江苏省林业局提出并归口。 本标准由江苏省林业科学研究院起草。 本标准主要起草人：张敏、陈庆生、周鹏、黄婧、郝明灼、李飞。 I DB32/T 3899—2020 河滩冬青组织培养技术规程 1 范围 本标准规定了河滩冬青组织培养的母株选择、外植体选择与处理、初代培养、继代增殖、瓶外生根 培养、增殖苗扦插、插后管理和记录。 本标准适用于河滩冬青的组培快繁。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的 修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用 于本标准。 LY/T 1882—2010 林木组织培养育苗技术规程 3 母株选择 选择河滩冬青优树株系或无性系分株。 4 外植体选择与处理 4.1 选择 在 4 月~6 月，选择连续 3 d 以上的晴天，从母株上剪取生长健壮无病虫害的当年生萌芽条作为外 植体，截取部位以萌芽条的中、下部为宜，规格以长度 10 cm ~15 cm、直径 3 mm 左右为宜。 4.2 灭菌 用中性洗洁精洗净外植体，并用自来水冲洗 10 min ~15 min。在超净工作台上，用 75 %乙醇溶液消 毒外植体 30 s，无菌水冲洗 2 次；再用 10 %次氯酸钠溶液浸泡外植体 8 min ~ 10 min，无菌水漂洗 2 次， 每次 5 min，随后置于灭菌处理过的滤纸上吸去表面水分。 5 初代培养 5.1 培养基 诱导培养基：MS+ 0.2 mg/L ZT +2.0 mg/L 6-BA + 0.5 g/L 活性炭，pH5.7。培养基制备按照LY/T 1882—2010的规定进行。 5.2 诱导培养 将经灭菌处理的外植体剪去接触灭菌液的伤口部位，切成约 1.0 cm 带芽茎段，接种在含有诱导培 1 DB32/T 3899—2020 养基的培养瓶中，培养温度为 24℃ ~ 26℃，光照强度为 1500 lx ~3000 lx，光照时间为 12 h~15 h。培养 30 d，长成 6 cm ~8 cm 高的无菌试管苗。 6 继代增殖 6.1 培养基 继代培养基：MS+ 4.0 mg/L ZT + 0.2mg/L IBA + 活性碳0.5 g/L，pH5.7。培养基制备按照LY/T 1882—2010的规定进行。 6.2 继代培养 将诱导培养的试管苗剪成 1 cm ~2 cm 带芽茎段垂直接种于继代培养基。培养温度为 24℃ ~ 26℃， 光照强度为 1500 lx ~3000 lx，光照时间为 12h~15h。每隔 50 d 继代 1 次。 7 瓶外生根培养 7.1 设施 宜在温室进行培养。 7.2 容器 宜采用塑料穴盘，穴孔呈倒锥形，口径约4.5 cm，高约5 cm。旧穴盘需清洗消毒后才可使用。 7.3 基质 基质选用 pH 6.2 ~ pH 6.8 的草炭。 7.4 基质的消毒处理 用0.2%高锰酸钾和0.2%多菌灵交替喷洒扦插基质至完全湿润，用薄膜覆盖堆捂，待使用前2 d ~ 3 d 揭膜晾晒，装入容器后即可扦插。 8 增殖苗扦插 8.1 插条处理 选择生长健壮的增殖苗，剪去芽苗根部膨大部分，清水清洗根部，按单株剪下，每株剪成3 cm~4 cm 带芽茎段作为插条。 8.2 扦插 插条基部采用500 mg/L IBA浸泡30 min，处理后用镊子将组培苗基部插入基质，深度为0.8 cm ~1.0 cm。 8.3 覆膜 扦插后浇透水，在穴盘上覆盖保鲜膜，保温保湿。 2 DB32/T 3899—2020 9 插后管理 9.1 环境控制 置于温度20℃~30℃、光照 2 000 lx ~2 500 lx、光周期 16 h/d、湿度80%的环境条件下培养，2周 ~ 3周后揭膜。 9.2 水肥管理 每隔 3 d 浇一次水，每两周喷一次叶面肥，喷施浓度为0.1 % ~ 0.3 % 的尿素溶液。 9.3 病害防治 每月喷一次杀菌剂，宜采用0.1%的多菌灵和百菌清混合药剂。 9.4 出苗 苗高10 cm~15 cm，根系发达，无病虫害，即可出苗。 10 记录 根据组织培养技术规程内容进行记录，按时填写，做到准确无误，记录保存2年以上。 _________________________________ 3