血液中乙醇的测定顶空气相色谱法.pdf
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司 法 鉴 定 技 术 规 范 SF/Z JD0107001——2016 血液中乙醇的测定 顶空气相色谱法 2016-9-22 发布 中华人民共和国司法部司法鉴定管理局 2016-9-22 实施 发 布 SF/Z JD0107001——2016 目 次 前言......................................................................................................................................................................... I 1 范围..................................................................................................................................................................... 1 2 规范性引用文件................................................................................................................................................. 1 3 原理..................................................................................................................................................................... 1 4 试剂和材料......................................................................................................................................................... 1 5 仪器..................................................................................................................................................................... 1 6 测定步骤............................................................................................................................................................. 2 7 结果计算............................................................................................................................................................. 3 附录 A （资料性附录） 乙醇对照品和内标气相色谱图................................................................................. 4 附录 B （资料性附录） 校准曲线...................................................................................................................... 5 SF/Z JD0107001——2016 前 言 本技术规范按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本技术规范的附录A和附录B为资料性附录。 本技术规范由司法部司法鉴定科学技术研究所提出。 本技术规范由司法部司法鉴定管理局归口。 本技术规范起草单位：司法部司法鉴定科学技术研究所。 本技术规范主要起草人：卓先义、刘伟、向平、沈保华、卜俊、马栋、严慧。 本技术规范所代替规范的历次版本发布情况为：SF/Z JD0107001——2010。 I SF/Z JD0107001——2016 血液中乙醇的测定 顶空气相色谱法 1 范围 本技术规范规定了血液中乙醇的顶空气相色谱测定方法。 本技术规范适用于血液中乙醇的定性及定量分析。 本技术规范的方法检出限为0.01mg/mL；定量下限为0.05mg/mL。 2 规范性引用文件 下列文件对于本技术规范的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本 技术规范。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本技术规范。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法（GB/T 6682-2008，ISO 3696：1987，MOD） GA/T 122 毒物分析名词术语 3 原理 本法利用乙醇的易挥发性，以叔丁醇为内标，用顶空气相色谱火焰离子化检测器进行检测，经与平 行操作的乙醇对照品比较，以保留时间进行定性分析；以峰面积为依据，用内标法定量。 4 试剂和材料 除另有说明外，水为GB/T 6682规定的二级水。 4.1 乙醇 色谱纯。 4.2 乙醇标准溶液 精密称取适量乙醇，用水配成10.0mg/mL乙醇标准储备溶液。储备液在冰箱中冷藏密闭保存，有效 期为6个月。试验中所用其它浓度的标准溶液均从上述储备液稀释而得，在冰箱中冷藏密闭保存，有效 期为3个月。 4.3 叔丁醇 色谱纯。 4.4 叔丁醇溶液 精密称取适量叔丁醇，用水配成5.0mg/mL叔丁醇储备液。储备液在冰箱中冷藏密闭保存，有效期 为12个月。将储备液用水稀释，得40.0μg/mL叔丁醇内标工作液，在冰箱中冷藏密闭保存，有效期为6 个月。 5 仪器 1 SF/Z JD0107001——2016 5.1 气相色谱仪 配火焰离子化检测器（FID）。 5.2 顶空进样器 配1mL定量进样环。 5.3 样品瓶 10mL，顶空自动进样器用。 5.4 硅橡胶垫 5.5 铝帽 5.6 密封钳 5.7 精密移液器 5.8 自动稀释仪 6 测定步骤 6.1 样品处理 用精密移液器或自动稀释仪取待测血液0.10 mL及0.50 mL 40.0μg/mL 叔丁醇内标工作液，加入样品 瓶内，盖上硅橡胶垫，用密封钳加封铝帽，混匀。 6.2 测定 6.2.1 顶空气相色谱测定参考条件 a） 色谱柱（1）：DB-ALC1（30m0.32mm1.8m）石英毛细管柱或相当者； 柱温：恒温40C； 色谱柱（2）：DB-ALC2（30m0.32mm1.2m）石英毛细管柱或相当者； 柱温：恒温40C； b） 载气：氮气，纯度≥99.999%，流速8mL/min； c） 进样口温度：150C； d） 检测器温度：250C； e） 加热箱温度：65C； f） 定量环温度：105C； g） 传输线温度：110C； h） 气相循环时间：3.5min； i） 样品瓶加热平衡时间：10.0min； j） 样品瓶加压时间：0.10min； k） 定量环充满时间：0.10min； l） 定量环平衡时间：0.05min； m） 进样时间：1.00min。 6.2.2 定性测定 样品溶液按照顶空气相色谱测定条件测定，以叔丁醇为内标，记录色谱峰的保留时间。将待测样品 色谱峰的保留时间与乙醇标准对照品的保留时间比较，相对误差在2%内，空白对照样品内标物色谱峰 正常而无乙醇的色谱峰，一般可以认为待测样品中含有乙醇；必要时，选择不同的色谱条件或用气相色 2 SF/Z JD0107001——2016 谱-质谱法确证。如果内标物色谱峰正常，而无乙醇的色谱峰时，可认为检验结果为阴性。乙醇对照品 和内标气相色谱图，参见附录A。 6.2.3 定量测定 本方法采用内标法－校准曲线法或内标法－单点校正法定量测定。 6.2.3.1 内标法－校准曲线法 采用内标-校准曲线法测定（见附录 B）。将乙醇对照品溶液进样，以乙醇和内标峰面积比为纵坐标， 乙醇对照品工作溶液浓度为横坐标绘制标准曲线，用标准曲线对待测样品进行定量，所测样品中乙醇的 浓度值应在线性范围内。 6.2.3.2 内标法－单点校正法 待测血液样品乙醇浓度在标准溶液浓度的±30%内可用单点法定量。 6.3 平行试验 按以上步骤对同一待测样品进行平行试验。 单柱单检测器两份样品测定结果按两份样品的平均值计算，双样相对相差不得超过10％（有凝血块 的血样不超过15％）。双样相对相差按式（1）计算： | C1 - C2| 双样相对相差（%） = 100 ………………………………（1） C 式中： C1、C2两份样品平行定量测定的结果； C 两份样品平行定量测定结果的平均值(C1+C2)/2。 双柱双检测器两份样品测定结果的相对标准偏差RSD（%）若不超过5％时（有凝血块的血样不超 过10%），结果按两份样品结果的平均值计算。 7 结果计算 血液中乙醇浓度测定采用内标法－校准曲线法定量或按式(2)计算： A Ai′c C = A′Ai …………………………………（2） 式中： C血液样品中乙醇浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL)； A血液样品中乙醇的峰面积； A′标准溶液中乙醇的峰面积； Ai′标准溶液中内标物的峰面积； Ai血液样品中内标物的峰面积； c标准溶液中乙醇浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL)。 3 SF/Z JD0107001——2016 附 录 A （资料性附录） 乙醇对照品和内标气相色谱图 A.1 按色谱柱（1）条件得乙醇对照品和内标气相色谱图，见图 A.1。 FID1 A, (2009\09040304.D) 叔丁醇(2.09) pA 45 乙醇 (1.43) 40 35 30 25 20 0.5 1 1.5 2 2.5 min 2.5 min 图 A.1 按色谱柱（1）条件得的乙醇对照品和内标气相色谱图 A.2 按色谱柱（2）条件得乙醇对照品和内标气相色谱图，见图 A.2。 FID2 B, (2009\09040304.D) 叔丁醇(2.03) pA 50 45 乙醇 (1.51) 40 35 30 25 20 15 0.5 1 1.5 2 图 A.2 按色谱柱（2）条件得的乙醇对照品和内标气相色谱图 4 SF/Z JD0107001——2016 附 录 B （资料性附录） 校准曲线 配制乙醇浓度为0.10、0.20、0.50、0.80、1.00、2.00、3.00mg/mL的水溶液，按6.1和6.2项下分析， 每一浓度点取2份，以乙醇与内标叔丁醇的峰面积比对乙醇浓度做标准曲线。 按色谱柱（1）条件测得的标准曲线方程为 X = 1.0761 C - 0.0162（r = 0.9997），按色谱柱（2）条件 测得的标准曲线方程为 X = 1.0655 C - 0.0177（r = 0.9997）。式中 X 为乙醇与叔丁醇的峰面积比值，C 为乙醇工作溶液浓度(mg/mL)。 5